Исследование на ДНК: модель реконструированного орального эпителия
Ополаскиватели с Na-DNA снижают дегенерацию клеток. Биомиметический подход на основе биореакторной модели реконструированного орального эпителия.
Авторы
Andrei Cristian Ionescu¹, Matteo Basso², Maria Giulia Pulcini², Arturo Dian², Eugenio Brambilla¹.
1. Лаборатория оральной микробиологии и биоматериалов, кафедра биомедицинских,
хирургических и стоматологических наук, Миланский университет, Италия.
2. Ортопедический институт IRCCS Galeazzi, кафедра биомедицинских, хирургических
и стоматологических наук, Миланский университет, Италия.
Исследование — лауреат 1-й премии (1st Prize winner study), базовое исследование (Basic research), IAO Congress 2019.
Цель исследования
Оценить преимущества добавления смеси ДНК натрия (sodium DNA) к ополаскивателю на основе хлоргексидина для ткани, состоящей из эпителиальных клеток человека (реконструированный оральный эпителий человека, Reconstituted Human Oral Epithelium, ROE), подвергаемой окислительному стрессу, — с точки зрения жизнеспособности клеток и морфологических изменений.
Материалы и методы
32 образца ткани были обработаны 4 разными ополаскивателями: (A) 0,2% CHX (хлоргексидин); (B) 0,2% CHX + Na-DNA; (C) Na-DNA; (D) отрицательный контроль — в течение 5 и 30 минут после окислительного стресса, вызванного 1-минутным контактом с H₂O₂. Чтобы изучить соотношение живых и погибших клеток, образцы анализировали с помощью колориметрического MTT-теста (тест жизнеспособности на основе тетразолия). Признаки клеточного дистресса (наличие вакуолей, изменения в ядрах и т. д.) и тканевого дистресса (расширение межклеточных пространств, нарушение эпителиальных слоёв и т. д.) оценивали с помощью конфокального лазерного микроскопа, а также гистологического анализа — под трансмиссионным электронным микроскопом и оптическим микроскопом.
Результаты — тест жизнеспособности. Группа H-C показала значимо более высокую жизнеспособность, чем H-D, что говорит о существенном защитном эффекте Na-DNA на жизнеспособность клеток.
Конфокальная лазерная микроскопия: CHX вызывал потерю межклеточных контактов в поверхностном слое. Группы PBS-C и H-C показали меньше погибших клеток, чем PBS-D и H-D соответственно.
Гистологическое исследование. Обработка CHX и, в частности, H₂O₂ вызывала изменения в структуре клеток. Группы PBS-B и особенно H-B показали меньше нарушений, чем PBS-A и H-A соответственно.
В обеих группах H-B и H-C часть клеток без признаков дегенерации обнаруживалась в самых глубоких слоях, где они были, вероятно, защищены сочетанным действием CHX и кислорода и где Na-DNA помогала минимизировать повреждение клеток.
Вывод. Добавление смеси ДНК натрия отчётливо показало защитный эффект против дегенерации клеток, вызванной окислительным стрессом. При добавлении в ополаскиватель или гель на основе хлоргексидина оно помогает минимизировать повреждение биологических тканей и ускорить заживление воспаления за счёт более быстрого заживления ран.
